SYPHILIS IgM EIA TEST KİTLERİ - Bio-Rad

SYPHILIS IgM EIA TEST KİTLERİ - Bio-Rad

SYPHILIS IgM EIA TEST KTLER
Ürün Kodu: 60117
Bio-Rad tarafından daıtımı yapılmaktadır
Bio-Rad kodu: 72520
3 boulevard Raymond Poincaré
92430-MARNES LA COQUETTE
FRANSA
Tel.: 33 1 47 95 60 00
Faks: 33 1 47 41 91 33
Lab21 Healthcare Ltd. Lanwades Busin ess Park
Kentford CB8 7PN NGLTERE
Tel.: + 44 (0) 1638 552882
552375
,
Faks: + 44 (0) 1638
Email: inf o @la b2 1.c om
inter n et: w w w.la b2 1.c om
TR
Lab2 1 Heal thc are Lt d
Sifilis Ig M Antik orl arı nı mm üno enzim atik Yö nte m le A lgıl ama Dozajı
96 t est Ürün K odu 601 17
Kull anım A lanı
Bu kit insan serumu veya plazmasında Treponema pallidum enfeksiyonuna özel IgM antikorlarının algılanmasına
yöneliktir; sifilis enfeksiyonlarına ayırıcı tehis koymakta kullanılır.
YA L NIZ CA i n vit ro T E
HS Ç N K UL LA NI LI R
Açıkl ama
Treponema pallidum spiroketası vasıtasıyla gelien enfeksiyonlarda organizmanın verdii primer yanıt IgM sınıfı
antikorlar üretmektir. Ardından IgG sınıfı antikorlar belirecektir; bu antikorlar hastalıın tüm safhalarında algılanabilir.
IgM sınıfı özel antikorlar sonunda azalarak, ortadan kaybolur: Dolayısıyla bu antikorların bulunması enfeksiyonun kısa
bir süre önce gelitiini göstermesi açısından faydalı bir göstergedir.
Lab21 Healthcare Syphilis Total Antibody EIA (Üret No: 60093/60094) gibi tarama testlerine paralel olarak kullanılan
Syphilis IgM EIA için mmünoenzimatik Test sifilis vakalarına tehis koymak ve bu vakaları saptamak için kullanılabilir.
Sifilis anneden fötüse geçebilir. IgM sınıfı antikorlar plasentaya nüfuz edemez: T. pallidum'a özel IgM antikorlarının
neonatal kan numunelerinde algılanması konjenital sifilis tehisine yardımcı olabilir.
Pr ensip
Mikrotiter tüpü hazneleri IgM sınıfı anti-human antikorlarından oluan bir kaplama ile birlikte teslim edilir. Serum veya
plazmada bulunan Treponema pallidum'a özel IgM sınıfı antikorlar numune üstü kaplı haznelerde inkübe edildii
anda, balanacaktır. Serbest kalan donanım yıkandıktan sonra, peroksidaz ile konjugat oluturan treponema
antijenleri ilave edilir; bu durumda bunlar kendilerine özgü tüm balı insan antikorlarına balanır.
Baka bir yıkama aamasından sonra, haznelere substrat/kromojen karıımı doldurulur ve kromojenin rengindeki
deiim enzimatik markörün varlıına iaret eder.
Her haznenin optik absorbansı uygun dalga boylarında ölçülür; ardından bu absorbans anti-Treponema pallidum IgM
sınıfı antikorların bulunup bulunmadıını tespit etmek amacıyla kontrol numuneleri ile karılatırılır.
Kiti n ç eri i
R1
Plak a (8 haznelik 12 sıra halinde Anti -h uman Ig M sı nıf ı
yerletirilmi 96 hazne),,
antiko rla r il e ka plı polis tire n
R2
Num une S ulan dı rma
Tamp onu
R3
Pr otei n ve sür fakt anla r iç er en
tamp on
1 (9 6 t est )
Kır mızı
20 ml
Pe roksid az il e ko njug at
K onj uga t (11 x konsantrasyonlu) olutu ra n T rep one ma palli dum
antije nle ri
Mavi
1,2 ml
R4
Konj uga t sul and ırm a
tamp onu
Sta bilizö r v e sü rfak tanl ar
içere n t ampo n
Mavi
12 ml
R5
Y ıka ma (20 x konsantrasyonlu)
Bir sür fakt an içer en s alin
solüsyo n
Re nksiz
125 ml
R6
P ozi tif k ont rol
nsan se rumu
Tur uncu
0,5 ml
R7
N e gati f ko ntr ol
nsan se rumu
Sa rı
0,5 ml
R8
S ubs tr at
Ür e p ero ksit v e
tetr ame tilbe nzidi n
Pem be
12 ml
R9
D u rdu rma sol üsyon u
0,5M H2SO 4
Re nksiz
12 ml
Kull anıl maya n ha znel eri n ye rle tiril ecei po etle r
Kull anım ekli
2
Uya rıla r v e Önl emle r
Yaln ızca in vi tro te his i çin k ullan ılı r.
Bu test düzgün bir eitim almı klinik laboratuar personeli tarafından kullanılmak üzere tasarlanmıtır.
Kullanılan tüm insan kaynaklı malzemeler teste tabi tutulmu ve HIV, Hepatit B ve Hepatit C enfeksiyonu açısından
negatif sonuç vermitir. Bununla birlikte söz konusu insan kaynaklı malzemeler potansiyel olarak bulaıcı
addedilmelidir; söz konusu malzemeler ayrıca bu tür malzemeler ile ilgili yürürlükteki standartlara uygun ekilde
ilenmeli ve atılmalıdır.
Kan numuneleri patojen organizmalar içerebilir. Mutlaka eldiven takın; atılacak malzemeleri uygun yöntemlerle
sterilize edin.
Cihazların bakım ve kalibrasyonu imalatçının talimatlarına uyulmak suretiyle doru ekilde yapılmalıdır.
Parti numaraları farklı olan baka kitlere ait reaktifleri birlikte kullanmayın veya birbirinin yerine koymayın. ie
kapaklarının ilgili ielere takıldıından emin olun. Bu kiti son kullanma tarihi geçtikten sonra kullanmayın.
De pola ma v e Daya nma
Teslim edilen tüm reaktifler 2 ila 8oC sıcaklıkta orijinal konteynerlerinde saklandıı takdirde (aralarında hiçbir bulama
olmaması kaydıyla) son kullanma tarihine kadar kullanılabilir. Sulandırılmı yıkama tamponu 2 ila 8oC sıcaklıkta 4
hafta dayanır. Yalnızca teste tabi tutulacak sıra sayısı için yeterli miktarda, sulandırılmı konjugat oluturun;
sulandırılmı bu konjugat 12 saat dayanır.
Orijinal ambalajlarından çıkarılan ve teslim edilen poetlerde 2 ila 8oC sıcaklıkta saklanan üstü örtülü plakalar,
açıldıktan sonra 4 hafta boyunca kullanılabilir.
Gerekli Cihaz lar
Kalibrasyonu ve bakımı doru ekilde yapılmı ve 10, 50 ve 100 mikrolitre (numune ve reaktifler) ve yaklaık 300
mikrolitrelik (yıkama sıvıları) hacimler daıtabilen pipetleme tertibatları.
450 nm, 550 nm ve 620 nm filtrelerle donatılmı plaka veya bant okuyucuları. 37oC inkübatör.
Sifilis için yapılan Lab21 Healthcare'in IgM EIA dozajı sıvıların kullanılması ve sonuçların yorumlanması için kolayca
otomatik hale getirilebilir. Birden fazla sistem bu amaçla kullanılabilir: Otomasyon konusunu danımak için kit ve
otomasyon sistemleri imalatçılarına bavurun.
Cihaz aaıdaki tolerans seviyelerine sahip olmalıdır:
Daıtılan hacim
nkübasyon sıcaklıı
nkübasyon süresi
+/- %10
+/- 2oC
+/- 2 dakika
Num une ler
Serum veya plazma numuneleri (EDTA, sodyum sitrat veya heparin ile alınan) kullanılabilir. Numuneler testten önce 1
hafta boyunca 2 ila 8oC sıcaklıkta saklanabilir. Daha uzun saklama süreleri gerekiyor ise, numuneler maksimum –
20oC sıcaklıkta dondurulmalı ve çözdürme ileminden sonra iyi karıtırılmalıdır.
Hemolizli, ikterik veya lipemik numunelerin dozajı analiz sırasında yapılabilir, ancak numune gösterge sistemi güvenilir
olarak kabul edilemez. Bakteri bulaan veya gözle görülür madde partiküleri içeren numuneler teste tabi
TUTULMAMALIDIR. Viral inaktivasyon gerçekletirmek amacıyla 56oC sıcaklıa kadar ısıtılan numuneler bu dozajda
kullanılabilir.
Doz aj Pr otok olü (Ma nüel )
Her türlü kullanımdan önce tüm reaktifleri ve numuneleri 18 ila 25oC sıcaklıa kadar ısıtın. Kullanımdan hemen sonra,
tavsiye edilen saklama koullarında saklayın.
Kullanımdan önce, 1 hacim yıkama tamponunu 20 hacim damıtık veya demineralize su ile karıtırarak yıkama
tamponunu sulandırın.
Teste tabi tutulacak numune sayısı için gerekli sayıda hazne sırası (R1) ve ayrıca kontroller için de 5 hazne alın (üç
örnekli negatif kontrol ve iki örnekli negatif kontrol). Kullanılmayan plakaları hava geçirmez plastik poetin içinde
saklayın ve saklama koullarını 2 ile 8oC arasında bulunan bir sıcaklıa getirin.
Kon tro ller
Teste tabi tutulan tüm partilerde, negatif kontroller üç kez ve pozitif kontroller de iki kez teste tabi tutulmalıdır.
Num une leri n l ave Ed ilmesi
Bir haznedeki R2 numune sulandırma tamponundan 100 L pipetleyin ardından her hazneye 10 L numune veya
kontrol ilave edin. Haznelerin içeriinin numune ilave edildikten sonra doru ekilde karıtırıldıından emin olun.
3
Haznenin içinde, numune sulandırma tamponu renk dei
tirir ve rengi numunenin ilave edildii anda,
kırmızı/pembeden açık bir renge/sarıya döner.
Bu renk dei
imi, numune sulandırma tamponu ilave edildikten sonra plakanın ölçümü 550 nm'de yapılarak, ardından
numunenin ilave edilmesinden sonra 450 nm'de yapılarak ölçülebilir. Tampon üzerinde yapılan örnek okumaya
kıyasla kaydedilen optik younluk artı
ı, numunenin ilave edildii haznelerde gerçekle
ir.
Renk dei
imi, ilave edilen numune hacminin miktarı ile balantılı deildir. malat esnasında sulandırılan kalite kontrol
serumları bu renk dei
ikliini gösteremezler.
37 oC sıcaklıkta 30 dakika inkübe edin; buharla
maya engel olmak için üstünü örtün.
Yıka ma
Yeterli miktarda R5 yıkama solüsyonu sulandırın (20 hacim damıtık veya demineralize su, artı boruları doldurmak,
pompaları alı
tırmak için gerekli hacim içinde 1 hacim)
Her döngüde tam bir dolum ve bo
altma salamak için, haznelerin içeriini çekin ve çalı
ma konsantrasyonundaki
yıkama tamponu ile 5 kez yıkayın. Gerekirse, artık sıvıları çıkarmak için, emici bir kâıt üzerinde ters çevrilmi
plakaya
sert bir darbe indirerek i
lemi sonlandırın.
Konj uga tın Hazı rlan ması
Konjugat, peroksidaz R3 ile birle
tirilmi
1 kısım Treponema pallidum antijeninin 10 kısım R4 konjugatı sulandırma
tamponuna ilave edilmesi ile hazırlanır. Sadece teste tabi tutulacak numune ve kontrol sayısına yetecek kadar
konjugat hazırlayın; her hazneye 50 l sulandırılmı
konjugat ilave edin. 12 saat sonra her türlü sulandırılmı
konjugat
artıını atın.
Örnein, 2 sıra için, peroksidaz R3 ile birle
tirilmi
100 l Treponema pallidum antijenini, 1 ml R4 konjugatı
sulandırma tamponuna ilave edin. Sadece dozajlar için gerekli miktarı sulandırın.
Konj uga tın lav e Edil mesi
Her hazneye pipetle 50 L sulandırılmı
konjugat ilave edin. Konjugat ilavesi 550 nm'de bir ölçüm yapılarak
dorulanır; konjugat ilave edilmi
bir haznenin absorbans deeri 0,080'in üzerinde olmalıdır.
37 oC sıcaklıkta 60 dakika inkübe edin; buharla
maya engel olmak için üstünü örtün.
Yıka ma
Her döngüde tam bir dolum ve bo
altma salamak için, haznelerin içeriini çekin ve çalı
ma konsantrasyonundaki
yıkama tamponu ile 5 kez yıkayın. Gerekirse, artık sıvıları çıkarmak için, emici bir kâıt üzerinde ters çevrilmi
plakaya
sert bir darbe indirerek i
lemi sonlandırın.
Subs tr atın la ve Edil mesi
Tüm haznelere substrat/kromojen R8 karı
ımından 50 L ilave edin. Substrat ilavesi 550 nm'de bir ölçüm yapılarak
dorulanır; substrat ilave edilmi
bir haznenin absorbans deeri 0,080'in üzerinde olmalıdır.
30 dakika boyunca 18 ila 25oC sıcaklıkta, ı
ık almayan bir yerde inkübe edin.
Re nk Dev elop manı nın Dur dur ulma sı
Tüm haznelere pipetle 50 L R9 durdurma solüsyonu ilave edin ve karı
tırın (renk maviden sarıya döner).
10 dakika içinde, tüm haznelerin absorbansını 450 nm dalga boyunda ölçün ve kaydedin; haznelerde bulunabilecek
her türlü optik kusur etkisinin giderilebilmesi için, bu ölçüm ve kayıt tercihen 600 - 630 nm aralıında yapılan bir
referans okuma i
lemi ile gerçekle
tirilmelidir.
Son uçla rın Y oru mlan ması K ont roll erin Geç erlili i
Negatif kontrol absorbanslarının ortalaması 0,100'ün altında olmalı ve her negatif kontrolün antikor indeksi 0,7'nin
altında olmalıdır.
Pozitif kontrol absorbanslarının ortalaması 1,200'ün üzerinde olmalı ve her pozitif kontrolün antikor indeksi 8,0'in
üzerinde olmalıdır.
Kontrollerden birinin ölçülen deerleri bu deer aralıklarının dı
ında ise, dozajı tekrarlayın.
4
Son uçla rın Hesap lanm ası
Eik deer (VS) negatif kontrollerin ortalaması (NC) + 0,100 absorbans birimi olarak hesaplanır.
Yani (NC1 + NC2 + NC3) + 0,100
3
Antikor indeksi (AI) kontrol veya test numunesinin absorbansı eik deer (VS) ile bölünerek belirlenir.
AI = Kontrol veya test numunesinin absorbansı
VS
AI deerleri 0,9'un altında olan numuneler sifilis IGM antikorları açısından N EG A TFtir.
AI deerleri 1,1 deerine eit veya bu deerin üzerinde olan numuneler sifilis IgM antikorları açısından P OZ T Ftir.
AI deerleri 0,9 ve 1,1 arasında olan numuneler (0,9 < EQL < 1,1) ÜPHE Ldir.
üpheli bir sonuç elde edilmesi durumunda, numuneler yeniden çift olarak teste tabi tutulmalıdır. Yeni dozaj da
üpheli sonuç verirse, yeni bir numune istenmelidir.
Aktif bir sifilis enfeksiyonu tehisi sadece sifilis IgM testinin verdii pozitif sonuca dayanamaz; bu tehis ayrıca baka
test sonuçlarına ve klinik kanıtlara da dayanmalıdır.
Pe rfo rma ns Özel likle ri Do rul uk
Test içi ve testler arası doruluk üç düzeyde, bir negatif numune ve yüksek younlukta ara IgM yanıtı niteliindeki iki
pozitif numune ile deerlendirmeye tabi tutulmutur. Test içi doruluk belirtilen düzeylerde birbirine paralel 48 ölçüm
kullanılarak hesaplanmıtır. Testler arası doruluk 5 farklı dozaj sırasında, numunelerin dozajını dört kopya olarak
gerçekletirmek suretiyle hesaplanmıtır.
T est içi
VA RY AS YO N
KA T SA YI SI %
Testl er ar ası
VA RY AS YO N
KA T SA YI SI %
Ne gati f
11,7
12,4
Ar a Poziti f
2,9
5,0
Güçlü Pozi tif
3,6
7,6
Özgüllük
Testin klinik özgüllüü kan donörlerinden alınmı 87 plazma ve serum numunesinin dozajı gerçekletirilerek
deerlendirilmitir. Numuneler sifilis için Lab21 Healthcare'in IgM dozajı ve rakip bir dozaj ile teste tabi tutulmutur.
Lab21 Healthcare'in sifilis IgM dozajı tüm numunelerin negatif olduunu ve bu ekilde % 100'lük bir özgüllük
olutuunu ortaya koymutur.
Duy arlı lık
Bu kitin performansını (CE) iaretini taıyan dier ürünler ile, sifilis serolojisi alanında uzmanlamı laboratuarlara
teslim edilen numuneler üzerinde karılatırmak için birçok klinik inceleme gerçekletirilmitir.
Sonuçların toplamı aaıda verilmitir:
I gM Poz (2 kit )
IgM Poz (sa dec e NML )
IgM Poz ( Sad ece die r
kit)
Do rul anm ı va kala r
Di er pozi tif si filis
serol ojisi
26
7
7
Di er neg atif sifili s
serol ojisi
0
0
2
Bir sifilis serokonversiyon paneli (Serologicals Inc, USA) kullanılarak ilave duyarlılık incelemeleri gerçekletirilmitir;
Lab21 Healthcare'in sifilis IgM kiti ve piyasada mevcut baka iki IgM kiti arasında %100 oranında bir uyum
saptanmıtır.
5
Kayn akça
1. Larson S.A. et al Laboratory Diagnosis and interpretation of Tests for Syphilis. Clinical Microbiology Reviews 1995;
8: 1-21.
2. Pope V. et al A manual of tests for Syphilis.
3. Norris S.J. Polypeptides of Treponema pallidum: Progress toward understanding their structural, functional and
immunological role.Microbiological Reviews, 1993;l 57:750-779.
4. Egglestone S.I. & Turner A.J.L. Serological Diagnosis of syphilis, Communicable Disease and Public Health 2000;
3: 158-162.
6
UK
DE
ES
IT
FR
SE
DK
P
Use By
Verwendbar bis
Fecha de caducidad
Utilizzare entro
Utiliser jusque
Använ före
Holdbar til
Fecha de caducidad
UK
DE
ES
IT
FR
SE
DK
P
Manufacturer
Hersteller
Fabricante
Fabbricante
Fabricant
Tillverkare
Producent
Fabricante
UK
DE
ES
IT
FR
SE
DK
P
In Vitro Diagnostic Medical Device
In Vitro Diagnostikum
Producto sanitario para diagnóstico in vitro
Dispositivo medico-diagnostico in vitro
Dispositif médical de diagnostic in vitro
In vitro-diagnostik
Medicinsk udstyr til in vitro-diagnostik
Producto sanitario para diagnóstico in vitro
I60117 CE V2.3
2008/06/25
UK
DE
ES
IT
FR
SE
DK
P
Temperature limitation
Zulässiger Temperaturbereich
Limite de temperatura
Limiti di temperatura
Limites de température
Temperaturbegränsning
Temperaturbegrænsning
Limite de temperatura
UK
DE
ES
IT
FR
SE
DK
P
Consult Instructions for Use
Gebrauchsanweisung beachten
Consulte las instrucciones de uso
Consultare le istruzioni per l'uso
Consulter les instructions d'utilisation
Se handavanddebeskrivningen
Se brugsanvisning
Consulte las instrucciones de uso
UK
DE
ES
IT
FR
SE
DK
P
Batch code
Chargenbezeichnung
Codigo de lote
Codice del lotto
Code du lot
Lot nummer
Lotnummer
Codigo de lot